Passaggi specifici della coltura cellulare

1. Attrezzatura comune

1. Attrezzatura nella sala di preparazione

Distillatore di acqua distillata singolo, distillatore di acqua distillata doppio, serbatoio per acido, forno, pentola a pressione, armadio di conservazione (conservazione di articoli non sterilizzati), armadio di conservazione (conservazione di articoli sterilizzati), tavolo di confezionamento.Attrezzatura nella sala di preparazione della soluzione: bilancia di torsione e bilancia elettronica (pesatura di medicinali), misuratore di PH (misurazione del valore PH della soluzione di coltura), agitatore magnetico (configurazione della sala di soluzione per agitare la soluzione).

2. Attrezzatura dell'aula culturale

Serbatoio di azoto liquido, armadietto per la conservazione di articoli vari, lampada fluorescente e lampada a raggi ultravioletti, sistema di purificazione dell'aria, frigorifero a bassa temperatura (- 80 ℃), condizionatore d'aria, bombola di anidride carbonica, tavolino (scrittura dei registri dei test).

3. Attrezzature che devono essere collocate nella camera sterile

Centrifuga (raccolta di cellule), piano di lavoro ultra pulito, microscopio invertito, incubatore a CO2 (incubazione della coltura), bagnomaria, macchina per la disinfezione e sterilizzazione a tre ossigeno, frigorifero a 4 ℃ (posizionamento del siero e della soluzione di coltura).

2、 Funzionamento asettico

（1） Sterilizzazione della camera sterile

1. Pulire regolarmente la stanza sterile: una volta alla settimana, utilizzare prima l'acqua del rubinetto per pulire il pavimento, pulire il tavolo e pulire il tavolo di lavoro, quindi utilizzare lisolo al 3 ‰ o bromogerammina o acido peracetico allo 0,5% per pulire.

2. Sterilizzazione dell'incubatore a CO2 (incubatore): pulire prima con bromogeramina al 3 ‰, quindi pulire con alcol al 75% o acido peracetico allo 0,5%, quindi irradiare con lampada a raggi ultravioletti.

3. Sterilizzazione prima dell'esperimento: accendere la lampada a raggi ultravioletti, lo sterilizzatore a tre ossigeno e il sistema di purificazione dell'aria rispettivamente per 20-30 minuti.

4. Sterilizzazione dopo l'esperimento: pulire il tavolo ultrapulito, il tavolino laterale e il tavolino del microscopio invertito con alcol al 75% (3 ‰ bromogerammina).

Preparazione alla sterilizzazione del personale di laboratorio

1. Lavarsi le mani con sapone.

2. Indossare indumenti isolanti, cappelli isolanti, maschere e pantofole.

3. Pulirsi le mani con un batuffolo di cotone alcolico al 75%.

Dimostrazione di funzionamento sterile

1. Tutte le bottiglie di alcol, PBS, terreno di coltura e trypsin portate nel banco di lavoro ultrapulito devono essere pulite con alcol al 75% sulla superficie esterna della bottiglia.

2. Operare vicino alla fiamma della lampada ad alcool.

3. Gli utensili devono essere sterilizzati prima dell'uso.

4. Gli utensili (come tappi di bottiglia e contagocce) che continuano ad essere utilizzati devono essere posizionati in un luogo alto e devono essere comunque surriscaldati durante l'uso.

5. Tutte le operazioni dovrebbero essere vicine alla lampada ad alcool e l'azione dovrebbe essere leggera e precisa e non dovrebbe essere toccata in modo casuale.Se la cannuccia non riesce a toccare il serbatoio del liquido di scarto.

6. Quando si aspirano più di due tipi di liquidi, prestare attenzione a sostituire il tubo di aspirazione per evitare contaminazioni incrociate.

Vedere il capitolo successivo per la disinfezione degli strumenti.